Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日益扩展

从第一次显现肝细胞会自身特异性到显现1DF高血压临床病患者的令人满意亲率在青较少年末期就有很好的叙述，多个肝细胞会自身特异性阴性的青较少年中都有70%在小鼠转换后10年末患病高血压，而随访15年的青较少年这一总数减低到84%。相比较之下，占临床1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的肺癌必要还不会得到必要的系统性。

越来越多的人开始采用再行系统来定义1DF高血压的令人满意：生殖在显现多种肝细胞会自身特异性时进到第1过渡期，显现皮质醇异常时进到第2过渡期，显现病患者时进到第3过渡期。一些多发肝细胞会自身特异性阴性的生殖，在1期和2期，令人满意较快，并发展为肺癌的1DF高血压。我们之前叙述了一四组在首次侦测到多种肝细胞会自身特异性抽样后至较少10年无高血压的极快令人满意者，这四组病患者人数较少，但特征更为明确。随后，我们见到肝细胞会神经性特异性CD8+T细胞会底物在令人满意很快的病患者中都理论上不存在，但在近期肺癌和密切相关的高血压病患者中都很难以侦测到。这可能会断定，与令人满意病患者相比较，这些病患者神经性底物的调控增强。

早期系统性断定，尽管调控性T细胞会(Treg)总数正常，但高血压病患者存在一些特性缺失，其中都包括对IL-2的底物技能降低。此外，高血压病患者中都的物理现象CD4+T细胞会可能会对调控更为具抵抗性，表现为物理现象T细胞会的抑止逼近，共存产生的Treg和体外产生的可借Treg，以及免疫个人经历的CD4+T细胞会中都IL-2底物逼近。本系统性的最终目标是叙述了CD4+调控性T细胞会(Treg)在一小群极很快令人满意者中都的特征，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX系统性是一项以人群为基础的纵向系统性，在21岁以下住院的病患者亲属中都检查1DF高血压的凶险环境因素。我们之前叙述了长期很快令人满意者的特征，他们保持良好多重肝细胞会自身特异性阴性超过10年，但不会显现高血压的临床病患者，快性或非透过性神经性。随后，10名再次保持良好无高血压并愿意包括大量血液抽样的很快令人满意者纳入T和B细胞会特性系统性。在目前为止的系统性中都，8名快令人满意者(SP四组)，中都位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞会自身特异性阴性。所有的四组织者都保持稳定1DF高血压令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞会自身特异性对某些免疫的过敏原，然而，一名病患者从未保持稳定2期至较少6年，但不会显现临床病患者，一名病患者被临床为高血压，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中都对该丝氨酸透过了单独评估。复合外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会精和T细胞会抑止试验评估丝氨酸中都Treg的高频亲率、表DF和特性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、也就是说和回归)透过无行政官员聚类系统性，评估Treg表DF。

结果：与心理健康丝氨酸相比较，来自快令人满意体的知觉CD4+T细胞会的行政官员聚类结果显示，激光阴的知觉CD4+ Treg高频亲率减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c升高的病患者与令人满意很快者和匹配的对照四组相比较，Treg谱有所相同。特性系统性断定，与心理健康丝氨酸相比较，来自很快令人满意体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞会抑止明显损毁。表现为对物理现象CD4+T细胞会CD25和CD134隐含的抑止减低。

三幅1 深入的表DF系统性结果显示，CD4+Treg亚DF在快令人满意描述符中都减低。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的光阴CD4+CD45RA -细胞会上。根据标识物隐含鉴别成10个元簇:知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;本站程Treg_1;本站程Treg_2;本站程Treg_3;和本站程Treg_4。(a)采用9个相同Treg标识分解成的10个元簇的MST。每个节点代表者一个战略性(100个战略性)，更为大的元战略性(10个元战略性)在节点四组周遭上色。每个节点中都的煎饼三幅对此单个标识的隐含等级。(b)每个元聚类的热三幅，以结果显示整体标识隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较核素为每个metacluster箱本站三幅(核素> 0.05%)未确定为HD和SP四组:本站程Treg_2 (e),本站程Treg_3 (f),本站程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞会(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞会(l)。紫色白点代表者人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的估测证实，Treg高频亲率的减低是令人满意很快的徽章。PG奈斯(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP四组织者和匹配的HD四组织者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含透过复合，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(杂色)四组以及丝氨酸SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的高频亲率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱本站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(本站程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(本站程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(本站程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+本站程T cell)。(g - i)果树簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突成的簇被识别为SP和HD描述符之间的相同。(j)箱本站三幅结果显示了在SP(杂色)和HD(灰点)四组中都，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相较核素(总数)。(k)直方三幅结果显示每个簇的表DF(粉红色)和Treg标识相较隐含与时代背景隐含(紫色);上列，本站程Treg_3;下面偷偷地，本站程Treg_4。时代背景与所有其他簇中都标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

三幅3 与心理健康献血者相比较，令人满意很快者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T细胞会元簇(知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;本站程Treg_2;本站程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个隐含标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的隐含热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中都所有HD(棕色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含并联，结果显示直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(紫色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(紫色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR隐含，从PG奈斯，从所有HD(棕色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)并联，结果显示直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

三幅4 来自很快令人满意的CD4+ treg细胞会控制物理现象CD4+T细胞会的技能降低。SP四组用紫色的本站和白点对此，HD四组用紫色的本站和白点对此，紫色的本站/白点对此丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被标识为CFSE, Treg按观察的总数校准。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培育成3紧接著透过流式细胞会精侦测。(a-d)与CD4+接收者者相较应当的treg培育成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育成。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。采用阴性对照(激光阴的响应当细胞会内含treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 物理现象CD4+T细胞会对很快令人满意的T细胞会转化的抑止更为敏感。SP四组用紫色的本站和白点对此，HD四组用紫色的本站和白点对此，紫色的本站/白点对此丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标识，treg按观察的总数校准。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培育成3紧接著透过流式细胞会精(CD25反染)和细胞会因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者联合培育成。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE抑止百分亲率(b)。(c,d) CD25抑止百分亲率(c)和CD134抑止百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授中都的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得成的结论是，来自很快令人满意子的转化知觉CD4+Treg在GITR隐含中都得到了扩展和丰富，凸显了再进一步系统性Treg在1DF高血压风险生殖中都的异质性的重要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28